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流式细胞术应用 | 漂亮完成细胞因子检测
点击次数:122 发布时间:2019-03-11

实验简介

细胞因子在淋巴细胞免疫功能调节方面发挥重要作用,它可以调节多种细胞的生长、分化和功能,调节正常与病理状态下的免疫应答。研究生理或病理免疫调节因素导致细胞因子合成的应答与改变是探寻疾病病因与免疫状态关系的重要工具。

本实验采用优化的一管 8 色的多色检测方案对人外周血 T 细胞亚群的 IFN-γ、IL-17、 颗粒酶、穿孔素表达情况进行了研究。从实验结果图上可看出,本实验在 CytoFLEX 上检测时各细胞群体分群明显,检测结果确切可信,能够非常漂亮地完成此类实验。

材料与方法

试剂

 

样品制备

Sample Type外周血单个核细胞
Species
Age of specimen样本染色后 1 h 之内完成上机检测
Prep Method

1. 取 200 ul 全血加 200 ul1640,并加入适量 PMA 等试剂,刺激 4 h;

2. 混匀后去 100 ul 刺激后的标本并加入相应膜抗,室温避光孵育 20 min;

3. 加固定液,孵育后离心去上清;

4. 加入适量生理盐水,1500 rpm 转速下离心 5 min 去除上清液;

5. 加破膜液混匀,并加入相应胞浆抗体适量,混匀后室温避光,孵育 20 min;

6. 加入适量生理盐水,1500 rpm 转速下离心 5 min 去除上清液;

7. 重复 6;

8. 加入 300-500 ul 预冷的 PBS,混匀后上机检测。

数据分析

使用 CD45/SSC 设门,选取淋巴细胞群(设逻辑门排除掉混杂的单核细胞),然后再取 CD3+T 淋巴细胞;分 别分析 Th 细胞与 TS 细胞的相关因子的表达情况。

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